Tunel test
تاریخ انتشار: 1404/12/01
بر اسـاس Eshre RPL Guideline، مطالعاتی با ارزش متوسـط، ارتباط بین سـقط مکرر و کیفیت کم اسـپرم را نشان داده اند. برای ارزیابی بررسی آسیب به DNA، چندین روش مستقیم و غیر مستقیم وجود دارد. متداولترین تسـت در روش غیرمسـتقیم، SCSA و در روش مسـتقیم TUNEL اسـت. هر دو روش در ویرایش شـشـم از کتاب WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen مطرح شده اند.
در میـان تمـام ســـنجشهـای کنونی، تعیین تجزیـه DNA در مردان نـابـارور بـا روش TUNEL اهمیـت بـالینی پیـدا کرده است، زیرا قطعات شکسته شده ی DNA در اسپرم ، توسط آنزیم تعیین می شود. تجزیه DNA را می توان با میکروسکوپ فلوروسنت یا فلوسیتومتری تعیین کرد ولی از آنجا که روشهای مبتنی بر فلوسیتومتری حساسیت بالاتری در مقایسـه با روش میکروسـکوپی دارند، روشـهای فلوسـیتومتری توصـیه می شـوند. اسـاس این تسـت براســاس فعالیت آنزیم ترمینال دئوکســی نوکلئوتیدیل ترانســفراز اســت که یک پلی مراز خاص اســت که بدون وابسـتگی به رشـته ی الگو فعالیت می کند و نوکلئوتیدها را به انتهای ٣'نوكلئوتيدها اضـافه می كند. از آنجاییکه وقتی سـلولها وارد مرحله آپوپتوز می شـوند، DNA شـروع به قطعه قطعه شـدن می کنند و خاصـیت ترمیم سـلولی از بین می رود، از این خاصــیت آنزیم TDT اســتفاده می کنند. آنزیم TDT، نوکلئوتیدهای نشــان دار شــده با فلورسـنت (دئوکسـیاوریدین تری فسـفات) را در انتهای رشـته های DNA شـکسـته شـده قرار می دهند که این سـیگنال با فلوسـایتومتری قابل ردیابی اسـت. رنگ پروپیدیوم یدید (PI) که یک رنگ فلورسـنت اسـت و به طور اختصاصی برای رنگ آمیزی اسید نوکلئیک استفاده می شود، در این تست به کار برده می شود.
می توان این تسـت را بر روی نمونه های تازه یا منجمد انجام داد. انجماد نمونه های منی خام یا شـسـته شـده بر نتایج سنجش TUNEL تأثیری ندارد.
نظرات
(0)
هنوز نظری ثبت نشده است.